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如何選擇熒光定量PCR儀器?

2016-07-07 16:30

1、儀器使用的廣泛程度  

如果不是一個(gè)新出現(xiàn)的儀器品牌,為保證所購(gòu)置的儀器有充分的可靠性,臨床PCR實(shí)驗(yàn)室可以從相應(yīng)儀器在國(guó)內(nèi)外使用的廣泛程度來(lái)判斷。應(yīng)用越是廣泛的儀器,越是經(jīng)過(guò)實(shí)踐驗(yàn)證的,也就越具有可靠性。

2、儀器的檢測(cè)通量(反應(yīng)孔數(shù))  

在購(gòu)買(mǎi)定量PCR儀的時(shí)候需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的要求來(lái)選擇不同通量的儀器。目前市面上的熒光定量PCR儀的檢測(cè)通量小到16多到384孔,實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)自己的檢測(cè)項(xiàng)目和發(fā)展?fàn)顩r,選擇合適的儀器,沒(méi)必要追求最昂貴的儀器,一般來(lái)說(shuō),96孔的通量足夠用了;如需尋找新藥靶點(diǎn)和疾病標(biāo)記等類(lèi)型的實(shí)驗(yàn),則可以考慮購(gòu)買(mǎi)384孔的儀器。

3、儀器的通道數(shù)量  

隨著醫(yī)院開(kāi)展的項(xiàng)目越來(lái)越多,比如基因表達(dá),單核苷酸多態(tài)性分析、高分辨率熔解曲線等,那么單通道的儀器則無(wú)法滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)室的需求了,而多通道的設(shè)計(jì)則能使其更方便地檢測(cè)多重PCR檢測(cè)及其衍生的基因表達(dá)等其他分析模式。

4、耗材的開(kāi)放性  

耗材如擴(kuò)增反應(yīng)管的開(kāi)放性可能會(huì)決定日常檢測(cè)成本的高低。作為臨床PCR實(shí)驗(yàn)室,在選擇實(shí)時(shí)熒光PCR儀時(shí),可考慮這一點(diǎn)。不過(guò)對(duì)于檢測(cè)HCV等RNA項(xiàng)目的時(shí)候,盡量使用去RNAnase酶耗材。

5、硬件設(shè)計(jì)特點(diǎn)  

熒光定量PCR儀主要有96孔板式和離心式等,每種設(shè)計(jì)都有它的獨(dú)到之處,但也都有無(wú)法避免的缺陷。  

96孔板的熒光定量PCR儀可以容納的樣本量大,最大可至100ul,而且無(wú)需特殊的耗材。傳統(tǒng)的96孔板儀器多采用鹵鎢燈激發(fā)、CCD檢測(cè)。其優(yōu)點(diǎn)在于:鹵鎢燈的光強(qiáng)比LED燈強(qiáng),波長(zhǎng)范圍廣,對(duì)于熒光染料的激發(fā)具有非常好的效果,性能比較穩(wěn)定,使用壽命約3000個(gè)小時(shí)左右;但CCD的檢測(cè)通常會(huì)因?yàn)槊總€(gè)樣品孔距光源和檢測(cè)器的光程各不相同,會(huì)產(chǎn)生邊緣效應(yīng),對(duì)結(jié)果產(chǎn)生一定的影響。為了保證精確、精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,這類(lèi)儀器在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中通常需要配合ROX校正染料,來(lái)平衡孔間差異;離心式的儀器通常選用LED激發(fā)、PMT檢測(cè),設(shè)計(jì)上避免了邊緣效應(yīng),同時(shí)PMT檢測(cè)對(duì)熒光信號(hào)可以放大或縮小,相對(duì)于CCD檢測(cè)更加靈活,靈敏度更高;但LED的熒光強(qiáng)度比較弱,波長(zhǎng)范圍也比較窄,因此,對(duì)熒光染料的激發(fā)效果不如鹵鎢燈;

6、運(yùn)行速度  

在熒光定量PCR儀的眾多技術(shù)參數(shù)中,升降溫速度也是非常重要的。更快的升降溫,可以縮短反應(yīng)進(jìn)行的時(shí)間,而且縮短了可能的非特異性結(jié)合和反應(yīng)時(shí)間,提高PCR的特異性。但是,運(yùn)行速度越快,對(duì)加熱制冷模塊的要求越高,因此,穩(wěn)定性是其存在的最大問(wèn)題,如果在市面上經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期考證的,穩(wěn)定性好的儀器,運(yùn)行速度越快,帶來(lái)的便捷越多;

7、靈活性  

在儀器基本性能得到保證的情況下,另外一方面則需要考慮儀器的靈活性,主要包括:儀器運(yùn)輸?shù)撵`活性,拆卸的靈活性,軟件升級(jí)的靈活性,模塊更換的靈活性以及使用的靈活性等。